一、前期準(zhǔn)備階段（受精前1-3天）

受精方式確定

依據(jù)精子質(zhì)量選擇：精子活力正常者采用常規(guī)IVF（體外受精），弱精、畸精或精子DNA碎片率高者采用ICSI（卵胞漿內(nèi)單精子注射）。

操作要點：IVF需控制精子濃度，ICSI需挑選形態(tài)正常、活力良好的精子注入卵子。

培養(yǎng)環(huán)境預(yù)處理

啟動低氧培養(yǎng)箱（5%O?、5%CO?、90%N?），校準(zhǔn)溫度至37℃±0.1℃，確保濕度維持在95%±2%。

準(zhǔn)備序貫培養(yǎng)基，分別適配卵裂期和囊胚期胚胎的營養(yǎng)需求，提前平衡pH值至7.2-7.4。

二、胚胎培養(yǎng)階段（第1-6天）

（一）卵裂期培養(yǎng)（第1-3天）

受精后觀察與培養(yǎng)

第1天：觀察受精情況，確認(rèn)正常受精卵（出現(xiàn)雙原核），淘汰未受精或異常受精卵子。

第2-3天：每日觀察胚胎卵裂情況，記錄細(xì)胞數(shù)量、均勻度及碎片率，篩選專業(yè)卵裂期胚胎（如第3天6-8細(xì)胞、碎片率＜20%）。

異常胚胎淘汰

淘汰卵裂停滯（如第3天＜4細(xì)胞）、碎片率＞30%或細(xì)胞大小嚴(yán)重不均的胚胎，僅保留符合繼續(xù)培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)的胚胎。

（二）囊胚培養(yǎng)（第4-6天）

培養(yǎng)基更換

第4天：將專業(yè)卵裂期胚胎轉(zhuǎn)移至囊胚期專用培養(yǎng)基，繼續(xù)在低氧環(huán)境中培養(yǎng)。

囊胚發(fā)育監(jiān)測

第5天：觀察囊胚形成情況，記錄囊胚腔大小、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層細(xì)胞形態(tài)。

第6天：對未完全形成囊胚的胚胎繼續(xù)培養(yǎng)，最終篩選出可活檢的專業(yè)囊胚（如Gardn評分≥3級）。

延時監(jiān)測輔助篩選

通過Time-lapse系統(tǒng)記錄胚胎發(fā)育動態(tài)，排除發(fā)育節(jié)奏異常的囊胚，提升活檢胚胎的專業(yè)率。

三、胚胎活檢階段（第5-6天，囊胚期）

活檢準(zhǔn)備

選擇專業(yè)囊胚（滋養(yǎng)層細(xì)胞充足、囊胚腔穩(wěn)定），在顯微鏡下定位滋養(yǎng)層區(qū)域，避開內(nèi)細(xì)胞團(tuán)。

準(zhǔn)備激光打孔設(shè)備和活檢針，確保操作環(huán)境無菌。

囊胚滋養(yǎng)層活檢（主流方式）

用激光在囊胚透明帶打一個小孔，通過活檢針抽取3-5個滋養(yǎng)層細(xì)胞，避免損傷內(nèi)細(xì)胞團(tuán)。

活檢后的囊胚立即放回新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，減少環(huán)境應(yīng)激。

樣本處理

將活檢細(xì)胞放入專用樣本管，做好標(biāo)記，快速送至檢測實驗室，避免樣本污染或降解。

四、胚胎檢測階段（活檢后1-2周）

（一）檢測類型與技術(shù)選擇

PGT-A（非整倍體篩查）

技術(shù)平臺：采用NGS（下一代測序）技術(shù)，檢測23對染色體的數(shù)量異常。

操作流程：對活檢細(xì)胞進(jìn)行DNA提取、擴(kuò)增，通過測序分析染色體非整倍體情況，檢測周期約1-2周。

PGT-SR（染色體結(jié)構(gòu)異常篩查）

技術(shù)平臺：選用NGS或Array-CGH技術(shù)，準(zhǔn)確 定位染色體結(jié)構(gòu)異常片段（如平衡易位、倒位）。

操作流程：結(jié)合夫妻雙方染色體異常類型設(shè)計檢測方案，明確胚胎染色體結(jié)構(gòu)是否正常，檢測周期約3-7天。

PGT-M（單基因病診斷）

技術(shù)平臺：采用PCR或NGS技術(shù)，針對已知致病基因設(shè)計特異性探針。

操作流程：先對夫妻雙方及家族成員進(jìn)行基因定位，再檢測胚胎是否攜帶致病基因，檢測周期約1-2周。

（二）檢測質(zhì)量控制

設(shè)立陰性和陽性對照樣本，驗證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，避免假陽性或假陰性。

對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行重復(fù)分析，確保染色體或基因異常判斷無誤。

五、結(jié)果解讀與胚胎處理階段（檢測完成后1-3天）

結(jié)果分類與解讀

正常胚胎：PGT-A提示整倍體、PGT-SR/PGT-M提示無異常的胚胎，具備移植潛力。

異常胚胎：存在染色體數(shù)量/結(jié)構(gòu)異常或攜帶致病基因的胚胎，建議放棄移植。

嵌合胚胎：部分細(xì)胞正常、部分異常的胚胎，需結(jié)合胚胎等級和患者情況，由醫(yī)生評估是否移植。

胚胎處理

正常胚胎：立即進(jìn)行玻璃化保存保存，標(biāo)注檢測結(jié)果和保存時間，待移植周期使用。

異常胚胎：按醫(yī)療廢棄物規(guī)范處理，或經(jīng)患者同意后用于科研（需符合倫理要求）。

嵌合胚胎：若評估可移植，需保存保存并在移植前告知患者潛在風(fēng)險。

六、關(guān)鍵注意事項

全程嚴(yán)格遵循無菌操作，避免胚胎污染和損傷。

每個環(huán)節(jié)做好標(biāo)記，確保胚胎與檢測樣本一一個應(yīng)，防止混淆。

檢測過程中及時與患者溝通進(jìn)度，同步反饋結(jié)果，以便患者做好移植準(zhǔn)備。

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